論文開題報(bào)告：基于RAPD的三角梅屬種質(zhì)資源遺傳多樣性研究

大學(xué)本科畢業(yè)論文(設(shè)計(jì))開題報(bào)告
學(xué)院：　化工學(xué)院　　　　　　　　　　　　專業(yè)班級：　08園藝（觀賞園藝）　　　　

課題名稱 基于RAPD的三角梅屬種質(zhì)資源遺傳多樣性研究

1、本課題的的研究目的和意義：
三角梅屬（Bougainvillea）隸屬于紫茉莉科(Nyctaginaceae)，最早由法國大探險家Louis-antoine de Bougainville于1766-1769年在南美洲的巴西發(fā)現(xiàn)并以他的名字命名。該屬僅有3個種具有觀賞價值，但因其花色多樣，在園林中廣泛應(yīng)用。全世界約有300個三角梅品種，我國保存的品種僅有80多個，且具有極高觀賞價值的雜交三角梅品種較少。
RAPD作為一種分子標(biāo)記，其操作簡便、快速、費(fèi)用少，在觀賞植物上己被用于遺傳多樣性方面的研究。通過文獻(xiàn)研究，發(fā)現(xiàn)過去和現(xiàn)在對三角梅的研究主要集中在栽培技術(shù)、組織培養(yǎng)等方面，分子生物學(xué)方面的研究幾乎為空白，居群的遺傳關(guān)系也不明了。對三角梅遺傳演化、種質(zhì)資源評價、遺傳多樣性等方面研究也較少。
本實(shí)驗(yàn)通過對
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廣泛的應(yīng)用。而且也是“核心種質(zhì)”篩選的一個重要工具。
RAPD技術(shù)作為一種分子標(biāo)記具有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，其操作簡便、快速、費(fèi)用少、安全性好，對模板DNA的需求量少、質(zhì)量要求低。分子標(biāo)記的發(fā)展使得在DNA水平上進(jìn)行遺傳變異的研究成為可能，并廣泛應(yīng)用于遺傳多樣性和親緣關(guān)系分析、品種分類與鑒定研究、發(fā)現(xiàn)和檢測突變體及指紋圖譜和遺傳圖譜的構(gòu)建。
國外對于三角梅的研究文章較少，在分子水平上的可查閱的有Richa Srivastava發(fā)表的一篇三角梅RAPD研究的文章。在國內(nèi)的研究中，王芬芬根據(jù)廈門植物園收集保存的近30個品種，可分為三類，分別為三角梅 (Bougainvilleaspeetabilis)、光葉三角梅(Bougainvilleaglabra)和雜交三角梅 (Bougainvilleabuttiana)。而洪項(xiàng)目認(rèn)為我國自 1872年引種栽培，現(xiàn)共有4個原生種，分別為光葉三角梅、紅花三角、秘魯三角梅和密節(jié)三角梅。
綜上所述，近年來我國學(xué)者對三角梅的研究多側(cè)重于組織培養(yǎng)、快速繁殖和栽培技術(shù)方面，而對三角梅的品種分類及其遺傳多樣性卻鮮有報(bào)道。

3、 本課題的主要研究內(nèi)容（提綱）和成果形式：
本實(shí)驗(yàn)采用三角梅48個品種為研究對象，來探討三角梅屬植物的遺傳多樣性。目的在于通過對48個品種的三角梅的RAPD分析，探索不同品種三角梅間的遺傳多樣性，為三角梅屬植物的分類和品種鑒定提供參考依據(jù)，同時也為三角梅屬植物的引種及新品種選育提供理論依據(jù)和應(yīng)用基礎(chǔ)。主要內(nèi)容如下：
（1）建立三角梅屬48個品種的RAPD分析體系，對48個品種的三角梅的核DNA遺傳多態(tài)性、聚類樹進(jìn)行分析；
（2）在分子標(biāo)記的基礎(chǔ)上，根據(jù)所得到的分子數(shù)據(jù)，并結(jié)合相關(guān)資料對三角梅的遺傳多樣性進(jìn)行綜合分析。
成果形式：畢業(yè)論文

4、擬解決的關(guān)鍵問題：
（1）優(yōu)化CTAB法提取三角梅48個品的DNA。
（2）建立RAPD反應(yīng)體系
（3）優(yōu)化RAPD-PCR反應(yīng)體系
（4）優(yōu)化瓊脂凝膠電泳系統(tǒng)
5、研究思路、方法和步驟：
思路：
參考他人文獻(xiàn)，根據(jù)查閱的資料設(shè)計(jì)適合三角梅的RAPD反應(yīng)體系，接著進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，檢測實(shí)驗(yàn)的合理性，并進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，緊接著進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并做實(shí)驗(yàn)補(bǔ)充，然后處理數(shù)據(jù)。
方法：
本實(shí)驗(yàn)采用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性 (RAPD)技術(shù)對三角梅遺傳多樣性進(jìn)行研究，RAPD分子標(biāo)記建立在PCR基礎(chǔ)之上。通過使用一系列具有10個堿基的單鏈隨機(jī)引物，對基因組的全部NDA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后經(jīng)瓊脂凝膠電泳分離，通過EB染色就可檢測被擴(kuò)增的DNA的多態(tài)性。為了使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)備，本實(shí)驗(yàn)采用單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)相結(jié)合，對影響PCR擴(kuò)增效果的一些因素進(jìn)行篩選和優(yōu)化。

步驟:
三角梅屬48個品種的嫩葉采集 → 核基因組的DNA的提取（CTAB法） → 基因組DNA組質(zhì)量檢測 → 引物的篩選 → RAPD擴(kuò)增反應(yīng) → PCR產(chǎn)物的檢測 → 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析 → RAPD分析三角梅的遺傳多樣性

6、本課題的進(jìn)度安排：
2011.09 查閱文獻(xiàn)，確定方法并進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定實(shí)驗(yàn)反應(yīng)體系。
提取三角梅屬植物的DNA
2011.10利用單因素和正交實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步優(yōu)化實(shí)驗(yàn)體系。
引物的初步篩選
2011.11 對篩選后的引物進(jìn)行RAPD-PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物檢測。
2012.01 對實(shí)驗(yàn)效果較不佳的引物重新進(jìn)行RAPD-PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物檢測。
2012.02 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析
2012.03-2012.05 寫畢業(yè)論文和準(zhǔn)備答辯材料

7、參考文獻(xiàn)：
[1]劉曉宇.RAPD分子標(biāo)記技術(shù)概述及應(yīng) ……（未完，全文共4000字，當(dāng)前僅顯示2020字，請閱讀下面提示信息。收藏《論文開題報(bào)告：基于RAPD的三角梅屬種質(zhì)資源遺傳多樣性研究》）