醫(yī)學(xué)論文：雷公藤多甙對(duì)大鼠卵泡發(fā)育及其旁分泌調(diào)控機(jī)制的影響

基金項(xiàng)目：河北省中醫(yī)藥管理局科研項(xiàng)目“補(bǔ)腎調(diào)沖方對(duì)卵巢早衰的影響及機(jī)制”，課題編號(hào)：200411027
通訊作者：董江川，dongjiangchuan@yahoo.com.cn，13436012689

雷公藤多甙對(duì)大鼠卵泡發(fā)育及其旁分泌調(diào)控機(jī)制的影響
楊涓1 高慧2 韓冰3 董江川4
(1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，重慶市 400016，2.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，承德市 067000，3.天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，天津市300150，4.重慶醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，重慶市 401331）

摘 要 目的：研究雷公藤多甙（GTW）對(duì)大鼠卵泡發(fā)育及其旁分泌調(diào)控機(jī)制的影響。方法：給于SD雌性大鼠不同劑量GTW灌胃28d后，采用光、電鏡觀察大鼠卵巢組織結(jié)構(gòu)、進(jìn)行各級(jí)卵泡及黃體數(shù)比較，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定卵巢組織卵泡刺激素受體（FSHR）、表皮生長(zhǎng)因子（EGF）及縫隙連接蛋白43（C*43）的mRNA表達(dá)。結(jié)果：各劑量雷公藤組小卵泡均明顯減少（P＜0.01或P＜0.05），雷公藤③、④、⑤組中、大卵泡及黃體有明顯減少（P＜0.01或P＜0.05），與藥物劑量呈負(fù)相關(guān)。各劑量雷公藤對(duì)卵泡超微結(jié)構(gòu)均有不同程度損害。各雷公藤組FSHR mRNA表達(dá)無(wú)顯著降低，但EGF 及C*43 mRNA表達(dá)顯著降低（P＜0.01或P＜0.05），與藥物劑量呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論 GTW可導(dǎo)致
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and C*43 in the ovary were detected by real-time PCR. RESULTS：In each GTW groups, little follicles were decreased significantly（P＜0.01或P＜0.05）.The middle and big follicles were decreased significantly，negative correlation with the dose of GTW in GTW group③, GTW group④ and GTW group⑤（P＜0.01或P＜0.05）.In each GTW group，the ovary ultrastructure was damaged obviously，positive correlation with the dose of GTW.The e*press of FSHR mRNA was not declined obviously in each GTW grous, but the e*press of EGF and C*43 FSHR mRNA was declined markedly which were negative correlation with dose of GTW（P＜0.01或P＜0.05）. CONCLUSIONS：The possible mechanism of GTW-induced ovary structure damage, ovarian reserve reduce and follicular obstacles caused was to restrain EGF and C*43.

Key Word：Glycosides of Tripterygium wilfordii Hook. f （GTW）；follicle；Follicle stimulating hormone receptor（FSHR）；Epidermal growth factor（EGF）；Conne*in43（C*43）

雷公藤多甙（Glycosides of Tripterygium wilfordii Hook. f，GTW）是臨床應(yīng)用最廣泛的雷公藤制劑，具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗腫瘤等藥理作用。部分自身免疫性疾病女性患者服藥后發(fā)生月經(jīng)紊亂和閉經(jīng)，故成為卵巢早衰的醫(yī)源性因素之一[1]。既往研究顯示，GTW對(duì)生殖功能具有抑制作用，表現(xiàn)為月經(jīng)周期延長(zhǎng)、閉經(jīng)、血漿雌二醇（E2）水平下降，卵泡雌激素（FSH）升高，故認(rèn)為其作用靶點(diǎn)在卵巢[2]，而對(duì)其生殖毒理的研究則以細(xì)胞凋亡為主要研究方向[3]，未見(jiàn)雷公藤對(duì)卵泡發(fā)育調(diào)控因子影響的研究報(bào)道。本研究通過(guò)對(duì)大鼠卵巢結(jié)構(gòu)觀察及各級(jí)卵泡計(jì)數(shù)比較研究雷公藤多甙對(duì)各發(fā)育階段卵泡的影響，并通過(guò)對(duì)旁分泌調(diào)控因子FSHR、EGF及C*43 mRNA表達(dá)的觀察來(lái)研究GTW對(duì)卵泡發(fā)育調(diào)控機(jī)制的影響，探討其生殖毒理機(jī)制。

1 儀器與材料
1.1 儀器
PMr10AD型倒置相差顯微鏡（日本OLYMPUS公司）；JEM-1010透射電鏡儀（日本電子公司）；SYD-K2030型冷凍病理切片機(jī)（沈陽(yáng)譽(yù)德電子儀器有限公司）；熒光定量PCR儀（瑞士羅氏公司）。
1.2 試藥
雷公藤多甙片（湖南協(xié)力藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20050402）；多聚甲醛固定液，戊二醛固定液；Trizol RNA提取試劑（Invitrogen公司生產(chǎn)，批號(hào)：15596026）；LightCycle SYBR Green I RNA一步法擴(kuò)增試劑盒和LightCycle質(zhì)控盒（德國(guó)Roche公司）。
1.3 動(dòng)物
12周齡，SPF級(jí)SD大鼠，♀，體重260±10g，由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供（許可證號(hào)：SC*K(京)2002-0001）。每日行陰道脫落細(xì)胞涂片，凡間隔4～5d出現(xiàn)兩次動(dòng)情期者納入實(shí)驗(yàn)；
2 方法
2.1 分組及給藥
將大鼠隨機(jī)分為正常組及GTW①（5mg•kg -1•d-1）GTW②（10mg•kg -1•d-1）、GTW③（20mg•kg -1•d-1）、GTW④（50mg•kg -1•d-1）、GTW⑤組（75mg•kg -1•d-1），10只/組。除正常組外均予上述劑量胃雷公藤多甙片水溶液ig ，共28d，次日處死大鼠進(jìn)行以下項(xiàng)目觀察。
2.2 組織學(xué)觀察
切取的卵巢組織用4%多聚甲醛固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋、連續(xù)5µm切片后蘇木精－伊紅（HE）染色、封片，取最大剖面切片光鏡下觀察，并計(jì)數(shù)具有正常結(jié)構(gòu)的各級(jí)卵泡數(shù)、卵泡總數(shù)及黃體數(shù)。卵泡分級(jí)方法參考文獻(xiàn)[4,5]：小卵泡直徑<30µ ……（未完，全文共9811字，當(dāng)前僅顯示2680字，請(qǐng)閱讀下面提示信息。收藏《醫(yī)學(xué)論文：雷公藤多甙對(duì)大鼠卵泡發(fā)育及其旁分泌調(diào)控機(jī)制的影響》）