論文開題報告：基于TRAP標記的半夏遺傳多樣性研究

大學本科畢業(yè)論文(設計)開題報告
學院：　化工學院　　　　　　　　　　　　專業(yè)班級：　08園藝　
課題名稱 基于TRAP標記的半夏遺傳多樣性研究

1、本課題的的研究目的和意義：

遺傳多樣性是物種和生態(tài)多樣性的基礎，一般指種內不同_和個體遺傳多態(tài)性程度即種內基因變化。 種內遺傳多樣性豐富，物種對環(huán)境的變化適應能力強，進化潛力大。 由于現在半夏盲目引種，栽培不規(guī)范及栽培環(huán)境不合格導致半夏種內基因變異及品種退化，藥材產量下降，影響經濟效益，開展遺傳多樣性研究對半夏分類，品種鑒定，引種和培育新品種具有巨大意義。

2、 文獻綜述（國內外研究情況及其發(fā)展）：


靶位區(qū)域擴增多態(tài)性(Target Region Amplified Polymorphism,TRAP) 是一種新型的基于 PCR的分
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、親緣關系和遺傳多樣性等方面取得了進展．
3、 本課題的主要研究內容（提綱）和成果形式：
1.提取半夏材料基因組DNA。
2.用已篩選的引物組合對全國不同產地和表型的半夏居群DNA進行TRAP遺傳多樣性分析。
4、擬解決的關鍵問題：

做聚丙烯下難凝膠電泳時，保證上樣孔的平整，上樣時使產物和溴酚藍混合均勻，電泳條帶清晰。

5、研究思路、方法和步驟：

步驟：（1）依次用H2O、ddH2O充分洗滌玻璃板和間隔片，再用無水乙醇擦拭玻璃板，晾干。直接用無水乙醇清洗樣品梳。
（2）凝膠膜板的裝配：
①將較大的（不帶凹口）玻璃板平放在實驗臺上。
②用少量凡士林輕涂間隔片，防止其滑動。
③將內板（帶凹口的玻璃板）放在（不帶凹口）玻璃板上，放妥。
④用夾子將兩玻板夾緊，為防止漏膠，底邊用防水膠帶密封。
⑤將兩玻板夾在制膠板上，并放入瓊脂糖密封槽中。注意：玻板要放在密封槽的中間，使玻板的四周都留有空間，以便瓊脂糖能夠流到玻板的前后左右。
⑥制備一定量（每塊膠約需30ml）的1%的瓊脂糖溶液，加熱使之透明澄清。趁熱倒入瓊脂糖密封槽中，膠凝固后可以密封玻板底部的側面和底面。
（3）聚丙烯酰胺凝膠的制備
根據玻璃板大小及間隔片厚度計算所需凝膠體積，并配膠、灌膠。（注意：操作時要戴手套！并且在托盤上進行，以免溶液濺出！操作動作要迅速�。�
①吸取9.95ml 30%丙烯酰胺、29.7ml dH2O、10ml 5*TBE放入小燒杯中，混勻。（6.0%的聚丙烯酰胺凝膠）
②再加入0.35ml 10%過硫酸胺、0.0175ml TEMED，輕輕旋轉混勻。
③將垂直膠板略傾斜，小心將凝膠倒入兩塊玻璃板之間，待凝膠離板頂約3mm處停止。
④膠板垂直放好，插入合適的樣品梳，勿使梳齒下形成氣泡，若有氣泡，用1mL注射器吸出。
⑤室溫中聚合1~2h，若凝膠回縮明顯，應補加。梳齒下出現折光帶時，表明聚合反應已經完成。
（4）電泳
①聚合完成后，在梳子周圍及其頂部噴些1*TBE，小心取出梳子。
②用1mL注射器吸取1*TBE沖洗加樣孔，小心移去瓊脂糖密封槽，用解剖刀小心除去凝膠底部的膠帶，回收瓊脂糖。
③將凝膠直立放入電泳槽，注意有凹口的玻璃板朝里，面向緩沖液槽放置，用夾板固定好。
④在電泳槽的上下槽中灌滿1*TBE溶液，驅盡凝膠底部附著的氣泡。用1*TBE溶液沖洗加樣孔。
⑤微量移液器在點樣板上：5μl DNA +1μl 6*Loading Buffer，充分吹吸混勻。上樣時，切勿讓樣品溢出槽外。
⑥接通電源，正極與下槽相連。120V電壓下電泳2.5h。
⑦電泳畢，從電泳槽中取出玻璃板，放在工作臺上，用解剖刀從夾層一角輕撬，移去上面的玻板。用注射器針頭使附著在間隔片內側的凝膠脫離，再用ddH2O小心沖洗下凝膠，置染色液中染色并進行結果觀察。
（5）染色
電泳后采用銀染的方法，銀染主要步驟：
(1)去離子水洗脫3min；
(2)浸泡于0.1%AgNO3染 ……（未完，全文共3235字，當前僅顯示1634字，請閱讀下面提示信息。收藏《論文開題報告：基于TRAP標記的半夏遺傳多樣性研究》）