論文開題：米曲霉為宿主菌的基因高效轉化系統(tǒng)建立

大學本科畢業(yè)論文(設計)開題報告
學院：化工學院　　　　　　　　　　　　　專業(yè)班級：08生物工程1班　

課題名稱 米曲霉為宿主菌的基因高效轉化系統(tǒng)建立

1、本課題的的研究目的和意義：

絲狀真菌中的米曲霉生長迅速、易于培養(yǎng)、有著很高的蛋白分泌能力，且又是公認的食品安全生產(chǎn)菌株，發(fā)酵及后處理技術成熟，是我國重要的微生物資源。故經(jīng)過一定的改良，其可構建使目的基因高效表達的米曲霉代謝工程菌。
CaCl2-PEG介導原生質(zhì)體轉化法是絲狀真菌最常用的轉化方法，其中原生質(zhì)體的制備率和再生率會直接影響進一步的基因轉化效果。本實驗課題研究和優(yōu)化米曲霉原生質(zhì)體形成以及細胞壁再生的條件，以提高米曲霉基因轉化效率，為進一步的基因改造工作奠定基礎。

2、 文獻綜述（國內(nèi)外研究情
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為困難，所以這方面研究的深度和廣度，比菌絲分離原生質(zhì)體有較大的差距[6]。
國內(nèi)米曲霉原生質(zhì)_備研究中主要采取了單因素法和正交實驗設計法，在已有的最佳米曲霉原生質(zhì)_備的條件下[7]，本課題以探究菌齡[8],酶解溫度、酶解時間、酶液濃度、酶體系[9][10]，菌絲預處理方式、再生培養(yǎng)方式[11][12]等條件對米曲霉原生質(zhì)_備的影響。本課題將綜合各種文獻并在實際實驗的基礎上，探究和完善米曲霉原生質(zhì)_備的方法，為進一步的基因改造工作奠定基礎。

3、 本課題的主要研究內(nèi)容（提綱）和成果形式：
本課題以米曲霉分生孢子為對象制備原生質(zhì)體，對影響原生質(zhì)_備和再生的條件，包括培養(yǎng)條件、菌齡、酶解溫度、酶解時間、酶液濃度，菌絲預處理、再生培養(yǎng)基等進行研究，確定制備米曲霉原生質(zhì)體的最優(yōu)化條件，為構建高效轉化系統(tǒng)奠定基礎。 米曲霉制備原生質(zhì)體，有兩種基本方式：一種是利用米曲霉菌絲_備；另一種是利用米曲霉孢子制備。本課題中除了分別對兩種方法做出制備條件探索外，還會進行對比試驗，以更加完善米曲霉原生質(zhì)_備的條件優(yōu)化。
本課題致力于米曲霉原生質(zhì)_備研究，主要的成果展示為米曲霉菌株展示，其中包含了一些實驗測的的數(shù)據(jù)以及和國內(nèi)研究情況的對比分析。最終的成果主要以實驗數(shù)據(jù)和實物圖來組合展示，已提供直接的學習、研究材料，以備今后做進一步的探究。

4、擬解決的關鍵問題：

1.米曲霉分生孢子制備原生質(zhì)體比菌絲更困難，如何順利完成其原生質(zhì)_備；
2.優(yōu)化原生質(zhì)_備方法，提高制備率和再生率，以最終提高轉化效率。

5、研究思路、方法和步驟：

研究思路和步驟：
1、平板法培養(yǎng)米曲霉菌株P-5；
2、蝸牛酶+纖維素酶混合酶液，對P-5作用制備原生質(zhì)體，此處進行多項單因素探究實驗；
3、在探究各種單因素的變化對米曲霉原生質(zhì)_備的影響時，主要通過顯微鏡原生質(zhì)體觀察計數(shù)法來計算原生質(zhì)_備率，表征各因素最佳值；
4、在各種相關因素探究完成后，進行組合實驗法，控制各種因素的最佳值進行原生質(zhì)體再生，計算制備率和再生率。
原生質(zhì)_備率 ＝（A-C）/A*100%
原生質(zhì)體的再生率＝[(B-C)/(A-C)]*100%
備注：A為對照菌液再生菌落數(shù)
B為制備得原生質(zhì)體在高滲培養(yǎng)基生長菌落數(shù)
C為原生質(zhì)體在普通培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)。

主要的研究方法：
1、本課題中，經(jīng)過對相關的文獻閱讀和一定的實驗比較，建立了米曲霉玻璃紙平板培養(yǎng)法的實際操作體系；
2、本課題中對原生質(zhì)體的破壁，采用了蝸牛酶+纖維素酶混合酶液酶解法；
3、本課題中需要探究相關條件對米曲霉原生質(zhì)_備的影響，故采取了單因素法以及多因素組合法進行實驗研究，以探索優(yōu)化條件；
4、本實驗中，采取了兩種實驗結果展示的方法：第 ……（未完，全文共3056字，當前僅顯示1543字，請閱讀下面提示信息。收藏《論文開題：米曲霉為宿主菌的基因高效轉化系統(tǒng)建立》）