論文開題：北極產(chǎn)蛋白酶菌株VV8、VV9及VV52的分類鑒定

大學(xué)本科畢業(yè)論文(設(shè)計)開題報告
學(xué)院：化工學(xué)院　　　　　　　　　　　　　專業(yè)班級：　　生物技術(shù)專業(yè)

課題名稱 北極產(chǎn)蛋白酶菌株VV8、VV9及VV52的分類鑒定

1、本課題的的研究目的和意義：

(1)本研究對菌株VV8和VV9進行分類鑒定，闡明細菌與其他類群之間的親緣關(guān)系。
(2)對極地微生物的測定作初步探索，并為極地微生物產(chǎn)低溫蛋白酶的低溫適應(yīng)性研究和其實際應(yīng)用打下一定的基礎(chǔ) 。

2、文獻綜述（國內(nèi)外研究情況及其發(fā)展）：


20世紀(jì)70年代以前，生物類群間的親緣關(guān)系主要是根據(jù)形態(tài)結(jié)構(gòu)、生理生化、行為習(xí)性等表型特征以及少量的化石資料來判斷它們之間的親緣關(guān)系。這些方法至今仍作為微生物的判斷依據(jù)之一。
自從1675年，荷蘭商人Leeuwenhock自制了第一架顯微鏡，并首先觀察到被他稱為“微小動物”的第一個微生物以來。隨著其他
……（新文秘網(wǎng)http://m.jey722.cn省略629字，正式會員可完整閱讀）……　
（蛋白質(zhì)、RNA、DNA等）在進化過程中的作用及其變化規(guī)律有了進一步認識，因此研究微生物的系統(tǒng)發(fā)育主要是分析和比較生物大分子的分子序列作為判斷各類生物進化譜系的主要指征。60-70年代，有些科學(xué)家通過比對某些蛋白質(zhì)分子（如細胞色素C）的氨基酸順序進行生物譜系分析。1981年，美國學(xué)者Carl Woese發(fā)現(xiàn)了測量所有微生物進化關(guān)系的尺子：rRNA作為進化的指征并建立16SrRNA系統(tǒng)發(fā)育樹。為了簡化測定過程，前后的幾十年間先后出現(xiàn)了另外一些方法，例如，測定核酸的堿基組成[(G+C)%]及分子雜交，血清學(xué)試驗，噬菌體分型
，氨基酸順序，蛋白質(zhì)分析，細胞壁等細胞成分。


近20多年來，隨著微電子、計算機、分子生物學(xué)、物理及化學(xué)等先進技術(shù)向微生物領(lǐng)域的_和多學(xué)科的交差，微生物的快速鑒定和自動化分析技術(shù)取得了突破性進展。例如三大鑒定系統(tǒng)： API 細菌數(shù)值鑒定系統(tǒng)，Enterotube 系統(tǒng)，Biolog 全自動或手動細菌鑒定系統(tǒng)；生物芯片的自動化運用；生物信息學(xué)的建立及其檢索數(shù)據(jù)庫的運用（NCBI、EMBL、DDBJ）。

2、 本課題的主要研究內(nèi)容（提綱）和成果形式：

主要內(nèi)容：本課題主要對分離自北極的蛋白酶產(chǎn)生菌株VV8、VV9以及VV52進行分類鑒定，探索其系統(tǒng)進化地位。實驗內(nèi)容包括16S rRNA 基因全長克隆測序及序列分析、生理生化特征實驗、DNA中G+C mol%測定等。


成果形式：以數(shù)學(xué)模型和論文的形式提交成果。
4、擬解決的關(guān)鍵問題：

擬解決的關(guān)鍵問題：對優(yōu)化過程中若干參數(shù)的相互影響與干擾進行細致調(diào)節(jié)，努力獲得全局化考量。

5、研究思路、方法和步驟：

5.1 16S rRNA 基因全長克隆測序及序列分析
（1）菌種平板劃線接種
通過平板劃線法進行菌種活化及獲取單一菌落，為后續(xù)實驗做準(zhǔn)備。實驗菌:分離自北極的蛋白酶生產(chǎn)菌株VV8、VV9及VV52；受體菌：大腸桿菌TOP10F菌種。培養(yǎng)后4℃保存?zhèn)溆谩?br>（2）細菌總DNA的提取
先分別取VV8、VV9、VV52以及TOP10F單一菌落接種于適量LB液體培養(yǎng)基進行菌株活化，再使用細菌基因組DNA提取試劑盒提取總DNA。取少量基因組進行電泳定性檢測，其余置于-20℃ 保存，備用。
（3）瓊脂糖凝膠電泳
（4）16S rRNA基因PCP擴增
（5）PCR 產(chǎn)物純化
（6）連接反應(yīng)
（7）感受態(tài)細胞的制備
（8）感受態(tài)細胞效價
（9）pMD18-T Vector轉(zhuǎn)化
（10）菌落PCR
（11）16SrRNA基因全長測序
（12）16S rRNA基因核酸內(nèi)切酶酶切反應(yīng)
（13）聚丙烯酰胺凝膠電泳
（14）16S rRNA基因序列分析
5.2 高效液相色譜法測定基因組DNA 中G＋C mol％含量
1） DNA 定量
2） DNA 的水解
3） 色譜分離條件
5.3細菌的生理生化試驗






6、本課題的進度安排：
1）第1周：查閱相關(guān)文獻資料，熟悉實驗室的基本操作流程和規(guī)范，了解菌株鑒定的方法。根據(jù)所查相關(guān)文獻資料進行實驗準(zhǔn)備。
2）第2-6周：16S rRNA 基因全長克隆測序及序列分析 ……（未完，全文共2776字，當(dāng)前僅顯示1764字，請閱讀下面提示信息。收藏《論文開題：北極產(chǎn)蛋白酶菌株VV8、VV9及VV52的分類鑒定》）